人血小板衍生生長因子(PDGF)ELISA試劑盒

ELISA檢測概述：

ELISA（酶聯(lián)接免疫吸附反應(yīng)分析）是以免疫學(xué)反應(yīng)為基礎(chǔ)，將抗原、抗ti的特異性反應(yīng)與酶對底物的高效催化作用相結(jié)合起來的一種敏感性很高的實(shí)驗(yàn)技術(shù)。 由于抗原、抗ti的反應(yīng)在一種固相載體-聚苯乙烯微量滴定板的孔中進(jìn)行，每加入一種試劑孵育后，可通過洗滌除去多余的游離反應(yīng)物，從而保證試驗(yàn)結(jié)果的特異性與穩(wěn)定性。

實(shí)際應(yīng)用中，通過不同的設(shè)計(jì)，具體的方法步驟可有多種。即：用于檢測抗ti的間接法、用于檢測抗原的雙抗ti夾心法以及用于檢測小分子抗原或半抗原的抗原競爭法等等。目前我們對客戶提供比較常用的ELISA雙抗ti夾心法及ELISA間接法服務(wù)

特點(diǎn)概述

1.專一性強(qiáng)。抗原與抗ti的免疫反應(yīng)是專一反應(yīng)， 而免疫酶技術(shù)以免疫反應(yīng)為基礎(chǔ),所檢測的對象是抗原(或抗ti)，使用的抗ti除標(biāo)記了酶以外，與普通抗ti的免疫反應(yīng)特性并無多大差別。

2.靈敏度高。由于抗ti聯(lián)結(jié)上了酶，因此，借助于酶與底物的顯色反應(yīng)，顯示抗原與抗ti的結(jié)合，大大提高了檢測的靈敏性,使檢測水平接近放射免疫測定法。

3.樣品易保存。經(jīng)過酶反應(yīng)顯示的有色產(chǎn)物大多比較穩(wěn)定，因此有利于樣品的保存。

4.結(jié)果易觀察。對檢測結(jié)果即可用肉眼觀察,又可用顯微鏡觀察,也可以用分光光度計(jì)進(jìn)行比色測定,還可用顯微鏡觀察。這是因?yàn)槟承┟阜磻?yīng)產(chǎn)物能使電子密度發(fā)生改變，從而引起被檢測物的顯示。

5.可以定量測定。溶液中的抗原物質(zhì)，應(yīng)用酶免吸附技術(shù)進(jìn)行比色測定,依據(jù)光密度值的變化，可以定量。預(yù)計(jì)用細(xì)胞分光光度計(jì)可對組織內(nèi)的抗原進(jìn)行免疫酶技術(shù)的定量測定。

6.可以大規(guī)模測定樣品。如有成千.上萬份樣品需要進(jìn)行檢測，免疫酶技術(shù)都能在較短時(shí)間內(nèi)完成。

7.儀器和試劑簡單。對免疫沒技術(shù)來說，不需要熒光顯微鏡,也不需要測定放射性的特殊儀器,所用儀器及試劑均屬一般性儀器與試劑，普通實(shí)驗(yàn)室及生產(chǎn)應(yīng)用單位均易購置

ELISA試劑盒樣品收集、處理及保存方法：

1）血清-----操作過程中避免任何細(xì)胞刺激。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管。收集血液后，1000×g離心10分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。

2）血漿-----EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測。1000×g離心30分鐘去除顆粒。

3）細(xì)胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。

4）組織勻漿-----將組織加入適量生理鹽水搗碎。1000×g離心10分鐘，取上清液

5）保存------如果樣品不立即使用，應(yīng)將其分成小部分-70 ℃保存，避免反復(fù)冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒，檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。

試劑盒的儲存及有效期：

未開封的試劑盒：所有試劑均按試劑瓶標(biāo)簽上所示保存。請注意，收到試劑盒后請盡快將TMB 洗滌液，終止液保存于4℃，其他試劑保存于-20℃。

使用后的試劑盒：剩余試劑仍需按照試劑瓶標(biāo)簽所示的溫度保存，開封后的酶標(biāo)板要加干燥劑后密封保存于-20℃，避免潮濕。

穩(wěn)定性：

經(jīng)測定，試劑盒在有效期內(nèi)按推薦溫度保存，其活性降低率小于5%。

人血小板衍生生長因子(PDGF)ELISA試劑盒

實(shí)驗(yàn)過程:

1.試劑準(zhǔn)備:所有試劑都必須在使用前達(dá)到室溫,使用后請立即按照說明書要求保存試劑。實(shí)驗(yàn)操作中請 使用一次性的吸頭,避免交叉污染。

2.加樣:加樣或加試劑時(shí)，請注意在吸取標(biāo)本/標(biāo)準(zhǔn)品，酶結(jié)合物或底物時(shí)，第yi個(gè)孔與最hou-一個(gè)孔加樣之間的時(shí)間間隔如果太大，將會導(dǎo)致不同的“預(yù)孵育“時(shí)間,從而明顯地影響到測量值的準(zhǔn)確性及重復(fù)性。一次加樣時(shí)間(包括標(biāo)準(zhǔn)品及所有樣品) 將控制在10分鐘內(nèi),如標(biāo)本數(shù)量多,推薦使用多道移液器加樣。

3.孵育:為防止樣品蒸發(fā),試驗(yàn)時(shí)將反應(yīng)板放于鋪有濕布的密閉盒內(nèi)，酶標(biāo)板加上蓋或覆膜，以避免液體蒸發(fā);洗板后應(yīng)盡快進(jìn)行下步操作,任何時(shí)侯都應(yīng)避免酶標(biāo)板處于干燥狀態(tài):同時(shí)應(yīng)嚴(yán)格遵守給定的孵育時(shí)間和溫度。

4.洗滌:洗滌過程中反應(yīng)孔中殘留的洗滌液應(yīng)在濾紙上充分拍干，勿將濾紙直接放入反應(yīng)孔中吸水，同時(shí)要消除板底殘留的液體和手指印，避免影響最hou的酶標(biāo)儀讀數(shù)。

[說 明]

1.由于現(xiàn)有條件及科學(xué)技術(shù)水平尚不能對所有供貨商提供的所有原料進(jìn)行全面的鑒定與分析，本產(chǎn)品可能存在一定的質(zhì)量 技術(shù)風(fēng)險(xiǎn)。

2.最終的實(shí)驗(yàn)結(jié)果與試劑的有效性、實(shí)驗(yàn)者的相關(guān)操作以及 當(dāng)時(shí)的實(shí)驗(yàn)環(huán)境密切相關(guān)，請務(wù)必準(zhǔn)備充足的標(biāo)本備份。

3.不同批次的同一產(chǎn)品可能會有少許差別，如:檢測限、靈敏度以及顯色時(shí)間等，請依據(jù)試劑盒內(nèi)說明書進(jìn)行實(shí)驗(yàn)操作，網(wǎng)站電子版說明書僅作參考。

4.只有全部使用本試劑盒配套試劑才能保證檢測效果，不能混用其他制造商的產(chǎn)品。只有嚴(yán)格遵守本試劑盒的實(shí)驗(yàn)說明才會得到最jia的檢測結(jié)果。

5.本公司只對試劑盒本身負(fù)責(zé)，不對因使用該試劑盒所造成的樣本消耗負(fù)責(zé)，請使用者使用前充分考慮到樣本的可能使用量，預(yù)留充足的樣本。

6.使用化學(xué)裂解液制備的組織勻漿或細(xì)胞提取液可能會由于某些化學(xué)物質(zhì)的引入導(dǎo)致ELISA實(shí)驗(yàn)結(jié)果偏差。

7.若樣本為細(xì)胞培養(yǎng)上清，因該類樣本干擾因素較多，如:細(xì)胞狀態(tài)、細(xì)胞數(shù)量、采樣時(shí)間等，所以可能存在檢測不出的情況。

8.某些天然蛋白或重組蛋白，包括原核及真核重組蛋白，可能因?yàn)榕c本產(chǎn)品所使用的檢測抗ti及捕獲抗ti不匹配，而不被檢測出。

常見問題解析：

1、試劑的選擇：選擇優(yōu)良試劑大家都是知道的，但是在檢測之前還應(yīng)該提前半個(gè)小時(shí)將試劑拿到常溫下進(jìn)行解凍。

2、加樣中可能遇到的問題。

3、洗板時(shí)容易造成誤差。

4、顯色問題：使用了過期的顯色劑或者是顯色劑用過后放置時(shí)間太長，都有可能造成顯色劑不顯色。

5、終止反應(yīng)：在加終止劑的時(shí)候由于傾倒速度快，產(chǎn)生氣泡，造成假陽性結(jié)果，所以在倒終止劑的時(shí)候要緩慢倒。

6、讀板：讀板的時(shí)候首先應(yīng)該保證板的清潔干凈。

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