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ELISA試劑盒操作指南:確保實驗結(jié)果準(zhǔn)確可靠的步驟詳解與注意事項
2024-09-10產(chǎn)品中心/ products
大鼠P選擇素(P-Selectin/CD62P)ELISA試劑盒本公司提供代測服務(wù),凡購買本公司ELISA試劑盒的客戶均可享受免費的ELISA代測服務(wù)。詳情敬請咨詢在線客服!公司產(chǎn)品齊全,因上架數(shù)量有限,未能全部上架,如需訂購或者產(chǎn)品詳情請直接聯(lián)系我司!
聯(lián)系電話:0755-28019324
品牌 | 其他品牌 | 貨號 | RQ-FS1660A |
---|---|---|---|
供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 品牌 | 瑞清 |
方法 | 競爭法、夾心法、間接法 | 檢測樣本 | 血清.血漿.組織.相關(guān)液體等 |
檢測種屬 | 人,小鼠,大鼠,植物,魚,蝦,蟹,牛,羊,狗,貓,微生物,細(xì)胞,土壤等動植物 | 售后 | 專屬服務(wù) |
大鼠P選擇素(P-Selectin/CD62P)ELISA試劑盒 |
檢測原理
試劑盒采用雙抗原一-步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA) 。往預(yù)先包被病毒性腹瀉病毒抗ti的包被微孔中,依次加入標(biāo)本、HRP標(biāo)記的檢測抗原,經(jīng)過溫育并徹di洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在suan的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。用酶標(biāo)儀在450NM波長下測定吸光度(OD值) ,與CUTOFF值相比較,從而判定標(biāo)本中豬病毒性腹瀉病毒(BVDV) 的存在與否。
樣品收集、處理及保存方法
1.血清:使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,操作過程中避免任何細(xì)胞刺激,收集血液后,3000轉(zhuǎn)離心10分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。
2.血漿: EDTA、檸檬suan鹽或肝素抗凝。3000轉(zhuǎn)離心30分鐘取上清。
3.細(xì)胞上清液: 3000轉(zhuǎn)離心10分鐘去除顆粒和聚合物。
4.組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000轉(zhuǎn) 離心10分鐘取上清。
5.保存:如果樣本收集后不及時檢測,請按一次用量分裝,凍存于-20°C, 避免反
復(fù)凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
自備物品
1.酶標(biāo)儀(450NM)
2.高精度加樣器及槍頭: 0.5-10UL、 2-20UL、 20-200UL、 200-1000UL
3.37℃恒溫箱
操作注意事項
1.試劑盒保存在2-8°C,使用前室溫平衡20分鐘。從冰箱取出的濃縮洗滌液會有結(jié)晶,這屬于正?,F(xiàn)象,水浴加熱使結(jié)晶完quan溶解后再使用。
2.實驗中不用的板條應(yīng)立即放回自封袋中,密封(低溫干燥)保存。
3.預(yù)處理后的樣本請按照操作步驟用樣ben稀釋ye適當(dāng)稀釋以達(dá)到試劑盒的的最jia檢測效果。.
4.嚴(yán)格按照說明書中標(biāo)明的時間、加液量及順序進(jìn)行溫育操作。
5.所有液體組分使用前充分搖勻。
大鼠P選擇素(P-Selectin/CD62P)ELISA試劑盒
常用方法:
1. 夾心法:
夾心法常用于檢測大分子抗原,一般的操作步驟為:
a. 將具有專一性的抗ti固著(coating)于塑膠孔盤上,完成后洗去多余抗ti
b. 加入待測檢體,檢體中若含有待測的抗原,則其會與塑膠孔盤上的抗ti進(jìn)行專一性鍵結(jié)
c. 洗去多余待測檢體,加入另一種對抗原專一的一次抗ti,與待測抗原進(jìn)行鍵結(jié)
d. 洗去多余未鍵結(jié)一次抗ti,加入帶有酶的二次抗ti,與一次抗ti鍵結(jié)
e. 洗去多余未鍵結(jié)二次抗ti,加入酶底物使酵素呈色,以肉眼或儀器讀取呈色結(jié)果
原理:針對抗原分子上2個不同抗原決定簇的單克隆抗ti分別作為固相抗ti和酶標(biāo)抗ti,將大分子抗原分別制備固相抗原和酶標(biāo)抗原結(jié)合物。
2. 間接法
間接法常用于檢測抗ti,一般的操作步驟為:
a. 將已知的抗原固著于塑膠孔盤上,完成后洗去多余的抗原。
b. 加入待測檢體,檢體中若含有待測的一次抗ti,則其會與塑膠孔盤上的抗原進(jìn)行專一性鍵結(jié)。
c. 洗去多余待測檢體,加入帶有酶的二次抗ti,與待測的一次抗ti鍵結(jié)。
d. 洗去多余未鍵結(jié)二次抗ti,加入酶底物使酶呈色,藉儀器(ELISA reader)測定塑膠盤中的吸光值(OD值),以評估有色終產(chǎn)物的含量即可測量待測抗ti的含量。
原理:利用酶標(biāo)記的抗抗ti以檢測已與固相結(jié)合的受檢抗ti。
3. 競爭法
競爭法是一種較少用到的ELISA檢測機(jī)制,一般用于檢測小分子抗原,其操作步驟為:
a. 將具有專一性的抗ti固著于塑膠孔盤上,完成后洗去多余抗ti
b. 加入待測檢體,使檢體中的待測抗原與塑膠孔盤上的抗ti進(jìn)行專一性鍵結(jié)
c. 加入帶有酶的抗原,此抗原也可與塑膠孔盤上的抗ti進(jìn)行專一性鍵結(jié),由于塑膠孔盤上固著的抗ti數(shù)量有限,因此當(dāng)檢體中抗原的量越多,則帶有酶的抗原可鍵結(jié)的固著抗ti就越少,亦即,兩種抗原皆競相與塑膠孔盤上抗ti鍵結(jié),即所謂競爭法之由來。
d. 洗去檢體與帶有酶的抗原,加入酶底物使酶呈色,當(dāng)檢體中抗原量越多,代表塑膠孔盤內(nèi)留下之帶有酶的抗原越少,顯色也就越淺。
e. 當(dāng)需要偵測無法獲得兩種以上單一性抗ti的抗原,或是不易得到足夠的純化抗ti以固著于孔盤上時,一般會考慮使用競爭法ELISA。
試劑盒小貼士
1. 在收到試劑盒后,為保證檢測效果,需要根據(jù)說明書中保存條件正確儲存。除非特別注明,試劑盒大多是在2~8°C條件下儲存
2. 在實驗進(jìn)行前,請確認(rèn)包裝中的試劑盒成分與說明書一致,再進(jìn)行后續(xù)操作
3. 溶解標(biāo)準(zhǔn)品過程中,注意標(biāo)準(zhǔn)品是否受潮,過程中要避免產(chǎn)生泡沫
4. 為了避免交叉污染,配置不同濃度標(biāo)準(zhǔn)品、上樣、加不同試劑都需要換槍頭。另外不同試劑請分別使用不同的移液槽
5. 每次孵育時,正確使用封板膠紙可保證結(jié)果的準(zhǔn)確性
6. 正確洗板有助于實驗結(jié)果的穩(wěn)定性
7. TMB顯色底物在上板前應(yīng)為無色,請避光保存。加入孔板后,將由無色變成不同程度的藍(lán)色
8. 終止液上板順序需與底物上板順序一致,加入終止液,溶液顏色由藍(lán)色變?yōu)辄S色。如果出現(xiàn)綠色,即表明終止液與底物未混勻,請充分混合
訂購說明:
※關(guān)于產(chǎn)品售價,由于市場的不穩(wěn)定性,價格變動是必然的,但是我們可以提供當(dāng)下公允的市場價格,批量訂購還可享受相應(yīng)的優(yōu)惠活動;
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深圳瑞清生物信息科技有限公司經(jīng)過數(shù)年的努力發(fā)展已迅速成為集產(chǎn)品研發(fā)、經(jīng)營為一體的專業(yè)化生物工程公司。公司具有完善的實驗技術(shù)開發(fā)平臺,成熟的抗原、抗體研發(fā)系統(tǒng),熟練掌握各種酶聯(lián)技術(shù),結(jié)合公司的研發(fā)團(tuán)隊,可以有效的保證公司產(chǎn)品強(qiáng)的穩(wěn)定性和高的準(zhǔn)確性,同時又具有競爭力的價格。 公司主營ELISA試劑盒,目前可以提供生化試劑、分子生物學(xué)試劑及試劑盒,各種抗體及免疫學(xué)試劑盒、實驗耗材等多門類上萬種產(chǎn)品,產(chǎn)品涉及分子生物學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)、免疫學(xué)等生命科學(xué)的各個領(lǐng)域。
豚鼠二胺氧化酶(DAO)ELISA試劑盒
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